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1 內(nèi)毒素及其來源
1.1 內(nèi)毒素
內(nèi)毒素（endotoxin）是存在于革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜表面的一種大分子物質(zhì)，一般只有在細(xì)胞死亡或分解時(shí)自行釋放到周圍介質(zhì)中，特殊條件下也可以從活細(xì)胞中直接泄漏出來。內(nèi)毒素又被稱為熱原，是一種脂多糖物質(zhì)，具有耐熱性，不易被去除。若疫苗中存在一定濃度的內(nèi)毒素，接種動(dòng)物后，可引起動(dòng)物發(fā)熱，休克等，嚴(yán)重時(shí)甚至造成死亡。
1.2 內(nèi)毒素的來源
因?yàn)楦锾m氏陰性菌無處不在，所以內(nèi)毒素幾乎存在于任何地方。在疫苗生產(chǎn)中一定要重視和盡可能減少內(nèi)毒素的污染。
生產(chǎn)用水中內(nèi)毒素的含量是導(dǎo)致疫苗安全性的關(guān)鍵因素之一。大量研究表明，疫苗生產(chǎn)過程中內(nèi)毒素主要來源于培養(yǎng)液和配制用水，其在貯存過程中易受到革蘭氏陰性菌的污染。貯水罐，純水系統(tǒng)的過濾器和連接管道，以及培養(yǎng)液容器等都可能受到革蘭氏陰性菌的污染。 工作人員進(jìn)出車間攜帶的物品，以及空氣凈化系統(tǒng)久不維護(hù)，都有可能造成生產(chǎn)車間內(nèi)的空氣塵埃濃度升高，導(dǎo)致內(nèi)毒素污染。
生產(chǎn)用具、管道、泵、閥門、濾器等的清洗消毒不*也會(huì)造成內(nèi)毒素污染。生產(chǎn)原料的污染，如血液制品，細(xì)胞培養(yǎng)基。人為操作不規(guī)范也會(huì)引起內(nèi)毒素污染。
2 內(nèi)毒素的檢測
目前，內(nèi)毒素的檢測方法較多，但是各存在利弊，因此，選取檢測方法要根據(jù)實(shí)際需求，不建議采取單一的檢測方法。
2.1 鱟試驗(yàn)法
鱟試驗(yàn)法是通過酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)而實(shí)現(xiàn)，內(nèi)毒素在二價(jià)陽離子的參與下激活C因子（FC），然后激活其它酶原，產(chǎn)生一系列凝集酶反應(yīng)。該方法是目前檢測內(nèi)毒素zui特異和zui靈敏的方法。
2.2 重組C因子法
重組C因子法是使用一個(gè)單一的蛋白（重組C因子）作為有效活性成分。反應(yīng)中內(nèi)毒素激活重組C因子，活化的重組C因子將熒光底物裂解，產(chǎn)生熒光復(fù)合物，定量檢測熒光復(fù)合物來量化內(nèi)毒素。這種方法可有效避免假陽性的產(chǎn)生。該方法可用于藥品生產(chǎn)，環(huán)境，器械生產(chǎn)中的內(nèi)毒素檢測。
2.3 熱原試驗(yàn)法
該方法是比較廣泛的檢測熱原的方法，利用微量內(nèi)毒素可引起動(dòng)物體溫升高的特性來測試其含量。這種方法存在靈敏度低，無法定量測定，種屬差異大，周期長等問題。
2.4 其它方法
除了上述較常見的方法外，還有一些方法也被應(yīng)用于內(nèi)毒素的檢測，如免疫學(xué)方法（酶聯(lián)免疫吸附檢測法，火箭免疫電泳鱟試驗(yàn)法，雙抗體夾心ELISA法等），生物學(xué)方法，化學(xué)發(fā)光法，流式細(xì)胞法，液相色譜法等。
3 內(nèi)毒素的去除
一直以來，去除內(nèi)毒素都是疫苗生產(chǎn)中的一個(gè)難題。其熱穩(wěn)定性高，對(duì)PH值不敏感。目前，已有一些去除內(nèi)毒素的方法，但其去除方法還有待進(jìn)一步研究。 3.1 超濾法
利用內(nèi)毒素與其他物質(zhì)的分子量的差別來去除內(nèi)毒素。一般在樣品流經(jīng)超濾膜時(shí)，超濾膜將內(nèi)毒素截留在膜上，而讓其它低分子量物質(zhì)透過，從而有效控制內(nèi)毒素的含量。超濾膜的內(nèi)毒素去除率較高，變化范圍較寬，高達(dá)98.7%，低至53.3%。因熱原是一類形態(tài)和相對(duì)分子質(zhì)量均不確定的物質(zhì)，其種類，濃度也會(huì)有所不同，因此內(nèi)毒素的去除率也是由多種因素所決定，如超濾運(yùn)行的壓力，超濾濃縮的倍數(shù)，超濾洗脫的體積等。由于內(nèi)毒素聚合體可能會(huì)在高溫或酸性環(huán)境中分解，進(jìn)而造成內(nèi)毒素分子的真正毒性部分類脂A穿過濾膜而進(jìn)入濾液中。該方法去除內(nèi)毒素，抗原損失較少，并且富集樣品，能夠滿足疫苗生產(chǎn)的要求。
3.2 活性炭法
該方法主要適用于水等組分簡單的小分子溶液的內(nèi)毒素去除。因其選擇性能差，易吸附有效成分，一般較少用。該方法可與超濾法聯(lián)合使用去除內(nèi)毒素的效果較佳。
3.3 熱處理法
該方法主要用于耐熱物品內(nèi)毒素的去除。
3.4 化學(xué)降解法
使用強(qiáng)酸，強(qiáng)堿或氧化劑使內(nèi)毒素自身降解，從而去除內(nèi)毒素。
3.5 親和膜分離系統(tǒng)法
此法基于親和色譜法，以纖維素膜等做基礎(chǔ)材料，通過化學(xué)的方法鍵合不同的配基，這些配基對(duì)內(nèi)毒素分子或聚集體有較強(qiáng)的吸附作用。此法吸附特異，吸附量大，去除率高，膜可再生，且具備一定的耐酸耐堿性。
3.6 其它方法
吸附技術(shù)和雙向萃取法也用于去除內(nèi)毒素，但這兩類方法涉及的試劑，步驟較多，易造成污染，使用較少。
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